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高中生物选修3基因工程,高中生生物遗传学、工程核心知识点
(1)基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”限制性内切酶(限制性内切酶)
(1)来源:主要从原核生物中分离纯化。
(2)功能:它能粗略地识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列,并在每条链的特定位置上断裂两个核苷酸之间的磷酸二酯键,因此具有浓度。
(3)结果:限制性酶切产生的DNA片段的末端通常有两种形式:粘性末端和固定末端。
相同点:都是有磷酸二酯键缝合在一起。
差异:E? co:liDNA连接酶源自T4噬菌体,只能连接双链DNA片段互补粘性末端之间的磷酸二酯键;而T4 DNA连接酶可以缝合两端,但连接平端。服从性低。
(2)与DNA聚合酶的异同: ? DNA:聚合酶,只能添加单个核苷酸吗?现有的核苷酸片段。最后形成磷酸二酯键。 DNA连接酶连接两个DNA片段的末端形成磷酸盐!二酯键。
(1)载体的必备条件:能够在受体细胞中复制并稳定保存。
:具有至少1个限制性酶切位点,用于插入外源DNA片段。
具有用于重组DNA鉴定和收集的标记基因。
(2) 最常用的载体是什么?质粒,是一种裸露的、简单的、独立的结构。位于细菌染色体外部、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
(3)其他载体:噬菌体衍生物、动物及动物病毒
(2) 基因工程的基本控制程序
第一步:获取目的基因
1、靶基因是指:编码蛋白质的结构基因。
2.原核基因是通过间接分离获得的,而真核基因是人工合成的。人工合成的政策基因!常用的方法包括逆转录和化学合成。
3、PCR技术扩增目的基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95使DNA熔化;第二步:冷却:至55~60,引物混合!互补DNA链;第三步:加热到70~75,热稳定性如何? DN;聚合酶启动从引物合成互补链。
第二步:基因表达载体的建立
1、目的:使目的基因在受体细胞中稳定并遗传到下一代,使目的基因得以表达并发挥作用。
2、组成:目的基因+启动子,+、终止子+标记。基因
(1)启动子:是具有特殊结构的DNA片段。它位于基因的“头端”。它是RNA 聚合酶识别和结合的位点。它可以驱动基因转录mRNA并最终获得所需的蛋白质。
(2)Stopper:是否也是具有特殊结构的DNA片段?位于基因的尾端。
(3)标记基因的作用:是为了判断受体细胞中是否含有目的基因,从而判断受体细胞中是否含有目的基因?细胞被筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。
第三步:将目的基因导入受体和体细胞_
1、转化的角度:是目的基因进入受体和细胞,并在受体细胞中保持稳定和表达的过程。
将目标基因引入动物体内?植物细胞:最常用的方法是根癌农杆菌转化法,其次是基因枪法和花粉管通道法。
将目的基因导入植物细胞:最常用的方法是显微注射技术。这种方法的受体细胞大多是:受精卵。
将目的基因导入微生物细胞:原核生物之所以充当受体细胞,是因为它们繁殖快,多为单细胞,遗传物质相对较少。最常用的原核细胞是“大肠杆菌”。转化方法是:先用Ca2+处理细胞,使其成为感受态细胞,然后将重组表达载体DNA分子溶解在缓冲液中与感受态细胞同化,促进感受态细胞在一定温度下吸收DNA分子,完成转化过程。
3、重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体的受体细胞的依据是标记基因是否能够表达。
第四步:目的基因检测及表达
1.什么是首次检查?测试转基因生物!目标基因是否通过收养插入到生物体的染色体DNA中? DNA分子杂交技术。
2、其次,需要将标记的目的基因作为探针与mRNA杂交,检测目的基因是否能够转录为mRNA。
3、终端检测目的基因能否翻译成蛋白质,就是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行“抗原抗体杂交”。
4、偶尔需要做一下。个体生物学程度的识别。转基因抗虫动物能否表现出抗虫特性。
1、动物基因工程:抗虫、抗病、抗逆;转基因动物;转基因操纵:对动物进行基因改造,以提高动物的品质。
2. 植物和基因工程:改良植物?生长速度、畜产品质量提高、使用转基因植物生产药物。
3.基因治疗:治疗普通上皮细胞。源基因?将基因导入患者体内,使基因表达产物发挥作用。
(4)蛋白质工程概念
蛋白质工程是指根据蛋白质分子的结构规律及其生物学功能之间的关系,通过基因修饰或基因合成对现有蛋白质进行修饰。新的,或者说制造出新的蛋白质来满足人类生产和生存的需要。 (基因工程原则上只能生产自然界中已经存在的蛋白质)
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