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2.限制性内切酶:主要从原核生物中分离纯化出来,它们能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并使每条链中特定位置的两个核苷酸之间的磷酸二磷酸酯键断裂。有粘性结局和战争结局两种。
3、DNA增强酶:按酶来源分为两大类:iDNA酶和T4DNA酶。两者都将双链DNA 片段“缝合”在一起,并恢复被限制性酶切割的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
4、常用载体:质粒、噬菌体衍生物、动物病毒。质粒是一种裸露的、结构简单的双链环状DNA分子,独立于细菌染色体,具有在所有人体内复制的能力。
5、基因工程的基本操作步骤主要包括四个步骤:目的基因的获取、基因表达载体的建立、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。
6、基因表达载体的建立是基因工程的第二步,也是基因工程的重点。目标是:目的基因稳定存在于受体细胞中,并能遗传到下一代并表达并发挥影响。它由:目的基因、启动子、终止子、标记基因(鉴定受体细胞是否含有目的基因,方便筛选)组成。
7. 受体细胞可分为动物、植物和微生物。
8、目的基因导入受体细胞后,是否能保持并表达其遗传特性,只能通过检测鉴定来实现。这是基因工程的第四步。
9、将目的基因导入动物细胞的方法:农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法。
10、将目的基因导入植物细胞的方法:显微注射技术。
11、将目的基因导入微生物细胞:用CaCl2处理,增加细胞壁的通透性。
12、检测目的基因是否插入受体细胞基因组以及mRNA是否转录的方法:DNA分子杂交技术(以目的基因为探针,找到杂交条带即为成功) )。
13、检测目的基因能否翻译成蛋白质的方法:抗原抗体杂交。
14. 除了分子检测外,有时还需要通过抗虫性或抗病性疫苗接种测试进行个体水平的鉴定。
15、目的基因的获取:直接从现有物种中分离,或人工合成。
16、靶基因:主要指编码蛋白质的结构基因,但也可能是具有调节作用的因子。
17. PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一种在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。原理是:DNA双链复制原理。条件是:必须有已知目的基因的核苷酸序列,以便根据该序列合成引物(两种)。其过程为:高温变性、低温复性、中温延伸。
18、动物基因工程一事无成:抗虫转基因动物、抗病转基因动物、逆转转基因动物、利用转基因动物提高动物品质。
19、植物基因工程前景广阔:可用于提高植物生长速度、提高畜产品质量、利用转基因植物生产药物、利用转基因植物作为器官移植供体、基因工程药物突然出现。
20、基因治疗:是将某种通用基因导入患者体内,使该基因的表达产物发挥作用,从而达到治疗疾病的目的。这是治疗遗传性疾病最有效的手段。其中,结果较为可靠的一种是体外基因治疗。
21. 原则上,基因工程只能生产自然界中已经存在的蛋白质。蛋白质工程是指根据蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系,通过基因改造或基因合成对现有蛋白质进行改良。或者创造新的蛋白质来满足人类生产生活的需要。
22、蛋白质工程的基本途径:从预期的蛋白质功能出发,设计预期的蛋白质结构,预测氨基酸序列,掩蔽相应的脱氧核苷酸序列(基因)。
23. 任何拥有某种生物体所有遗传信息的细胞都有可能发育成一个完整的生物体。也就是说,每一个生物细胞都具有全能性的特征。
24.动物细胞工程:动物组织培养技术(基础)、动物体细胞杂交技术。
25、细胞分解:是使已分解的细胞经诱导后获得其特有的结构和功能,转变为未分解细胞的过程。创伤和外源激素可以增强外植体细胞的合成代谢,并继续分裂和增殖形成愈伤组织。
26、动物组织培养是在无菌和人工控制条件下,在人工配制的培养基上培养离体的动物器官、组织和细胞,并提供适当的培养条件,诱导愈伤组织和神经丛的形成。芽,最终形成完整的植株。
27、动物体细胞杂交是在一定条件下将不同物种的动物体细胞融合成杂交细胞,然后将杂交细胞培养成新的动物体的技术。
28.动物细胞工程的实际应用:动物繁殖新方式(微繁殖、农作物解毒、人工种子生产)、农作物新品种培育(单倍体育种、体细胞突变育种等)、细胞产品工厂、化学品生产(人参)细胞发酵罐生产人参皂苷)。
29. 植物细胞工程常用的技术技术包括:植物细胞培养(基础)、植物细胞融合、植物细胞核移植、单克隆抗体生产等。
30、植物细胞培养就是从植物体中取出相关器官,分散成单个细胞(胰蛋白酶或胶原酶),然后置于合适的培养基中,让这些细胞发育和增殖。
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